猪圆环病毒病是由猪圆环病毒Ⅱ型（Porcine Circovirus 2，PCV2）引起的猪的一种多体系功能妨碍性疾病，其临床表现多种多样，主要为断奶仔猪多体系衰竭综合症、猪皮炎与肾病综合征、母猪繁衍妨碍等。

　　本试剂用于检测猪血清中猪圆环病毒Ⅱ型抗体，可用于猪圆环病毒Ⅱ型疫苗免疫作用点评。如在运用的过程中遇上问题，请与广州华南生物工程有限公司技术人员联络。

　　本试剂盒由预包被猪圆环病毒Ⅱ型重组cap蛋白的酶标板、酶符号物及其他配套试剂组成，运用酶联免疫法（ELISA）原理检测猪血清、血浆样本中猪圆环病毒Ⅱ型抗体。试验时在酶标板中参加对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有猪圆环病毒Ⅱ型抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗刷除掉未结合的其他成分后；再参加酶符号物，与酶标板上抗原抗体复合物产生特异性结合；再经洗刷除掉未结合的酶符号物，在孔中加TMB底物液，与酶标结合物反响构成蓝色产品，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；参加停止液停止反响后，产品变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反响孔中的吸光值，即可知样品是否含有猪圆环病毒Ⅱ型抗体。

　　【适用仪器】含450nm、630nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

　　1.取动物全血按惯例办法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长时间需置-20℃保存。

　　2.用样品稀释液将待检血清按40倍稀释（如5μl血清参加195μl样品稀释液中，混匀）。阴、阳性对照不必稀释。

　　3.浓缩洗刷液运用前应康复至室温使沉积溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成作业洗刷液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗刷液)。如在运用的过程中遇上问题，请与广州华南生物工程有限公司技术人员联络。

　　2.取所需用量酶标板条，设阴性/阳性对照各2孔，未用的板条赶快密封，2～8℃保存。

　　3.阴、阳性对照孔别离参加阴、阳性对照100μl；样品孔每孔参加稀释后的样品100μl。

　　5.甩去孔内液体，每孔加350μl作业洗刷液，静置30秒后弃去，重复洗刷5次，最终一次拍干。

　　8.每孔顺次加底物液A、底物液B各50μl，混匀，盖好盖板膜，置37℃避光反响10分钟。

　　9.每孔加停止液50μl，混匀，于450nm(可用630nm作参比波长）测定各孔吸光值。

　　【参考值】试验正常的情况下，阴性对照的均匀OD值即ODNC应≤0.3，阳性对照的均匀OD值即ODPC应≥0.6。

　　该试验仅作为定性检测猪血清、血浆中猪圆环病毒Ⅱ型抗体，依据SP值凹凸可作抗体水平强、中、弱的大略评价。

　　1.试验操作时需戴手套、穿作业衣，严厉健全和履行消毒阻隔准则，各种试验废弃物都应按感染物处理。

　　2.停止液有腐蚀性，应防止触摸皮肤和衣物，如不小心触摸请立即用很多自来水冲刷。

　　3.酶标板从冷藏环境中取出时应康复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。